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玉米赤霉烯酮檢測試劑盒
產(chǎn)品時(shí)間:2016-11-07
玉米赤霉烯酮檢測試劑盒將進(jìn)一步加強(qiáng)人才培養(yǎng)、產(chǎn)品創(chuàng)新,持續(xù)不斷地提升企業(yè)核心竟?fàn)幜Γ瑢?shí)現(xiàn)具有高科技產(chǎn)業(yè)體系、知識化創(chuàng)業(yè)團(tuán)隊(duì)的化大集團(tuán)企業(yè),更好、更快捷、更*的服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域,迎接新一輪世界經(jīng)濟(jì)一體化所帶來的機(jī)遇與挑戰(zhàn)。

本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床

玉米赤霉烯酮檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)

 

1 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料、食用油、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)(又稱F-2 毒素),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗玉米赤霉烯酮抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.3ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測下限:
谷物及配合飼料…………………6ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
玉米赤霉烯酮……………………100%
玉米赤霉酮………………………13%
玉米赤霉醇………………………<1%
 2.5 樣本回收率:
谷物及配合飼料…………………90%±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液:1ppm……………………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:乙腈、正己烷、二氯甲烷 
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:樣本提取液
    90%乙腈,即V乙腈:V去離子水=V9:V1。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 谷物(大米、玉米、小米等低脂含量)及配合飼料
處理方法 
1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加8ml樣本提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取0.5ml上清,加入2ml去離子水,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
    稀釋倍數(shù):20    檢測下限:6ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編    號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

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